WB，蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。通過抗原抗體反應(yīng)對目標(biāo)蛋白的表達(dá)進(jìn)行半定量檢測，還可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析。WB作為一種方便可靠的研究工具，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面，將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)一起在蛋白質(zhì)組時代發(fā)揮重要作用。
目前科研人的 WB 現(xiàn)狀就是干貨都懂，實(shí)驗(yàn)狀況卻頻出。辛辛苦苦花時間制備的細(xì)胞卻遇到提取液檢測不到目的蛋白、目的蛋白信號弱 、轉(zhuǎn)膜效率低 、顯色或曝光后無條帶 、Western blot背景高且不均勻、非特異性條帶、條帶拖尾或變形等常見的問題。眾所周知，有效的樣品制備是影響 WB 實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性的重要因素。貴州醫(yī)科大學(xué)分子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室就使用上海凈信冷凍研磨儀制備了人體胃癌細(xì)胞樣品提取蛋白做WB實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)樣品：人體胃癌細(xì)胞；
實(shí)驗(yàn)器材：冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN、研磨管、氧化鋯珠若干；
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.細(xì)胞沉淀，加緩沖液，提取液，離心重懸；
2.加入氧化鋯珠，與細(xì)胞沉淀物的比例1:1；
3.設(shè)置研磨參數(shù)，啟動。
實(shí)驗(yàn)效果圖：
研磨前（未加研磨珠-加研磨珠-研磨后)
附：實(shí)驗(yàn)儀器圖片凈信冷凍研磨儀JXFSTPRP-CLN
上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速、高效、制冷的研磨系
統(tǒng)。它能在非常短的時間內(nèi)將土壤、植物和動物的組織/器官、細(xì)菌、酵母、真
菌、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨、粉碎、混合機(jī)細(xì)胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域。
